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色譜柱被污染后如何正確清洗?

更新時(shí)間:2021-07-12  點(diǎn)擊次數(shù):6868
  色譜柱度優(yōu)化功能,或“GO”功能,把線性梯度轉(zhuǎn)化成階梯梯度,在已確認(rèn)的洗脫峰附近,優(yōu)化洗脫條件。先用一個(gè)小的色譜柱純化一個(gè)小部分樣品,一旦運(yùn)行完畢,選擇優(yōu)化按鈕。然后選擇目標(biāo)峰,一個(gè)新的,優(yōu)化了的,基于梯度洗脫方法就自動(dòng)產(chǎn)生了。選擇一個(gè)新的色譜柱和收集支架,分離方法就根據(jù)新柱子的大小自動(dòng)調(diào)整, 并準(zhǔn)備運(yùn)行。
 
  色譜柱污染后的清洗和再生:
 
  當(dāng)柱子被污染,它的色譜行為和沒被污染的柱子會(huì)有些不同。被污染的柱子能產(chǎn)生反壓問題。被污染的反相柱子必須清洗和再生才能恢復(fù)原來的操作條件。
 
  再生被污染HPLC柱子的關(guān)鍵是知道污染物的性質(zhì)并且能找到適當(dāng)?shù)娜軇﹣砣コH绻廴臼且驗(yàn)橹貜?fù)進(jìn)樣時(shí)強(qiáng)保留物質(zhì)的累積引起的,利用簡單的步驟來除去這些污染物往往能恢復(fù)其色譜行為。有時(shí)候,經(jīng)過多次操作以后的色譜柱用90~100%的溶劑B(雙溶劑反相系統(tǒng)中較強(qiáng)的溶劑)沖洗20個(gè)體積可以**污染物。例如,柱子中殘留的脂質(zhì)就能用非水溶劑如甲醇、乙晴、四氫呋喃。
 
  一般來說,所有的清洗方法都有類似的形式。所用的溶劑都是隨溶劑強(qiáng)度增加,經(jīng)常*后一個(gè)溶劑是非常疏水的(如醋酸乙酯甚至是烴),可以用來溶解非極性物質(zhì)如脂質(zhì)和油類。我們必須保證一系列溶劑中每個(gè)溶劑都能與下一個(gè)溶劑互混。清洗過程要結(jié)束時(shí),必須借助一個(gè)中等強(qiáng)度能互混的溶劑而回到原始溶劑系統(tǒng)。例如,異丙醇是一個(gè)非常好的作為中間步驟的溶劑,因?yàn)樗芘c正己烷或二氯甲烷互溶又能與水相溶劑互溶。但是異丙醇粘度非常大,必須確保較低的流速以免使泵壓過高。沖洗色譜柱時(shí),沖洗液由色譜柱出液端直接接入廢液瓶,不能流經(jīng)檢測池,以**測池被污染。
 
  反相色譜柱沒有使用緩沖溶液,請(qǐng)使用以下溶劑系列再生:
 
  100%甲醇→100%乙腈→75%乙腈-25%異丙醇→100%異丙醇→100%二氯甲烷→100%正己烷→100%二氯甲烷→100%異丙醇→100%乙腈。
 
  反相色譜柱使用緩沖溶液,請(qǐng)使用以下溶劑系列再生:
 
  水→乙腈→氯仿(或異丙醇)→乙腈→水。
 
  表 用來沖洗的溶劑體積、時(shí)間
 
  色譜柱尺寸  柱體積  所用溶劑的體積  沖洗時(shí)間
 
  150-4.6   2.5ml  50ml   50min
 
  250-4.6   4.2ml  80ml   80min
 
  每種溶劑至少?zèng)_洗20個(gè)柱體積。如250mm×4.6mmHPLC分析柱,可以用1ml/min的流速來沖洗,沖洗后使用沒有緩沖的流動(dòng)相進(jìn)行平衡色譜柱。
 
  注:如果簡單的有機(jī)溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì),說明色譜柱嚴(yán)重污染,沖洗溶劑可以用①0.05M稀硫酸,②二甲基亞砜(DMSO),③二甲基甲酰銨-水(50:50),用低于0.5ml/min的流速?zèng)_洗非常有效。
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