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HPLC液相色譜儀技術入門者須知

更新時間:2021-05-08  點擊次數:1666
        HPLC液相色譜儀廣泛存在于當前應用和發展較廣泛、較有潛力的領域,包括生物、醫藥、環境等方面,它適于易揮發、半揮發性有機小分子化合物的分析。
  HPLC液相色譜儀的技術原理:
  分配系數與組分、流動相和固定相的熱力學性質有關,也與溫度、壓力有關。在不同的色譜分離機制中,K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數,離子交換色譜法為選擇性系數 (或稱交換系數),凝膠色譜法為滲透參數。但一般情況可用分配系數來表示。
  在條件(流動相、固定相、溫度和壓力等)一定,樣品濃度很低時(Cs、Cm很小)時,K只取決于組分的性質,而與濃度無關。這只是理想狀態下的色譜條件,在這種條件下,得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下,隨著濃度的增大,K減小,這時色譜峰為拖尾峰;而有時隨著溶質濃度增大,K也增大,這時色譜峰為前延峰。因此,只有盡可能減少進樣量,使組分在柱內濃度降低,K恒定時,才能獲得正常峰。
  HPLC液相色譜儀色譜的特點:
  高壓--壓力可達150~300 kg/cm。色譜柱每米降壓為75 kg/cm以上。
  高速--流速為0.1~10.0 mL/min。
  --塔板數可達5000/米。在一根柱中同時分離成份可達100種。
  高靈敏度--紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。
  HPLC與經典液相色譜相比有以下優點:
  速度快--通常分析一個樣品在15~30 min,有些樣品甚至在5 min內即可完成。
  分辨率高--可選擇固定相和流動相以達到合適分離效果。
  靈敏度高--紫外檢測器可達0.01ng,熒光和電化學檢測器可達0.1pg。
  色譜柱可反復使用--用一根色譜柱可分離不同的化合物。
  樣品量少,容易回收--樣品經過色譜柱后不被破壞,可以收集單一組分或做制備。
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